Terapia con Stem Cells en Hepatitis B

Tipo de Stem Cell 

Células madre mesenquimáticas derivadas de tejido adiposo (AD-MSC) y células madre mesenquimales derivadas de médula ósea (BM-MSC) 

Método de obtención

- Liposucción simple y procedimientos invasivos como punción de médula ósea 

- AD-MSC tratadas con factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), oncostatina M (OSM) y dimetil sulfóxido (DMSO) podrían diferenciarse en células similares a los hepatocitos

Vía de administración

Células madre mesenquimales: por vía intravenosa periférica

Resultados a corto plazo

AD-MSC de pacientes con hepatitis B crónica tienen un potencial de diferenciación similar hacia el linaje hepático que las BM-MSC, las mismas que no eran susceptibles a la infección por HBV. 

Resultados a mediano plazo
Seguro para el tratamiento de pacientes con hepatitis crónica al aplicar AD-MSC para el transplante autólogo.

Resultados a largo plazo

Se logró reducir la tasa de mortalidad en pacientes que desarrollaron insuficiencia hepática crónica debido a la presencia de hepatitis B, además los pacientes mostraron un bajo desarrollo de complicaciones al tratamiento. 

Transplante autológico de células madre derivadas de tejido adiposo

Referencias Bibliográficas:

1. Wang, Y., Wang, F., Zhao, H., Zhang, X., Chen, H., & Zhang, K. (2015). Human adipose-derived mesenchymal stem cells are resistant to HBV infection during differentiation into hepatocytes in vitro. International journal of molecular sciences, 15(4), 6096–6110. doi:10.3390/ijms15046096

2. Fluxá D, Silva G. CÉLULAS MADRE: FUNDAMENTOS Y REVISIÓN DE LA EXPERIENCIA CLÍNICA EN ENFERMEDADES HEPÁTICAS [Internet]. Vol. 28, Revista Médica Clínica Las Condes. Elsevier BV; 2017 [citado el 26 de diciembre de 2019]. p. 314–21. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0716864017300500#fig0010

Transgénico vegetal para Hepatitis B

El método de control de la infección viral es la vacunación. Sin embargo, en muchos países no es tan extendida. Las plantas son las más convenientes para cumplir el mismo objetivo; ya que los antígenos que causan una respuesta inmune activa, también pueden ser sintetizados en células vegetales. Las vacunas comestibles actualmente se basan en frutos, hojas y semillas de plantas transgénicas. El antígeno de hepatitis B de superficie (HBsAg) sintetizado en la planta Solanum tuberosum (papa), obtenido usando el plásmido pBMAg en la Agrobacterium tumefaciens cepa LBA4404, no difiere del antígeno del virus VHB y estimula la formación de inmunoglobulinas IgG y el estudio en ratones muestran la posibilidad de usar plantas transgénicas como una sustancia para la obtención de una vacuna comestible y segura contra la hepatitis B. 

Tomado con fines académicos de: https://sioposthelpmo.cf/las-vacunas-microbianas-producidas-por-la-planta-descargan-los-juegos

Ventajas de los Transgénicos

1. Aumentar la producción de alimentos, ya sea a través de animales o plantas transgénicos.
2. La mejora de las características nutritivas de los alimentos. Así, es posible la obtención de alimentos con mayor contenido en vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales
3. La obtención de cultivos resistentes a la sequía y al frío.
4. La prolongación de la conservación y durabilidad de los alimentos.
5. Elaboración de tratamientos como fármacos o vacunas a través del uso de proteínas recombinantes.

Desventajas de los Transgénicos

1. La generación de animales transgénicos también es costosa, debido al largo período de gestación, el tamaño de la camada y el mayor costo de mantenimiento de los animales receptores.
2. Puede haber una alta tasa de mortalidad y otros efectos nocivos en los animales utilizados por los investigadores para crear razas transgénicas.
3. Se requiere un gran número de receptores para la transferencia de embriones debido a la baja tasa de transgénesis.
4. Invasión de ecosistemas, estos productos transgénicos al ser más resistentes, terminan eliminando las especies originales.
5. La ingesta de alimentos y su posible relación con el desarrollo de enfermedades, esto debido al aumento de toxicidad en los alimentos.

Referencias Bibliográficas:

1. Rukavtsova, E. B., Rudenko, N. V., Puchko, E. N., Zakharchenko, N. S., & Buryanov, Y. I. (2015). Study of the immunogenicity of hepatitis B surface antigen synthesized in transgenic potato plants with increased biosafety. Journal of Biotechnology, 203, 84–88. doi:10.1016/j.jbiotec.2015.03.019 ; sci-hub.tw/10.1016/j.jbiotec.2015.03.0192. 
2. Parmar P. Transgenic Animals: Advantages and Disadvantages [Internet]. BioTechnology Notes. [citado 18 diciembre 2019]. Disponible en: http://www.biotechnologynotes.com/animals/transgenic-animals/transgenic-animals-advantages-and-disadvantages/678

ADN recombinante artificial

El gen sintético de thermophilus RecA se clonó en el vector pUC57. Este gen(RecA gen) se escindió del pUC57- RecA plásmido como un fragmento NdeI / HindIII y se clonó en el vector pET26b. El ADN plasmídico que se obtuvo de pET26b se introdujo en células competentes ER2566 para la expresión de RecA recombinante.

La expresión de esta proteína puede mejorar las técnicas de diagnóstico, ya que mejora la sensibilidad a virus de ADN como es el caso de la hepatitis B.

Tomado con fines académicos de: https://cdn.thinglink.me/api/image/671310406794346498/1024/10/scaletowidth

Referencias Bibliográficas:

1. Sundarrajan S, Rao S, Padmanabhan S. Cloning and high-level expression of Thermus thermophilus RecA in E. coli: purification and novel use in HBV diagnostics [Internet]. Vol. 49, Brazilian Journal of Microbiology. Elsevier Editora Ltda; 2018 [citado el 8 de diciembre de 2019]. p. 848–55. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1517838217309656?via%3Dihub

Recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

Un ejemplo claro de recombinación en la naturaleza del VHB es el proceso de infección al hepatocito alterando el núcleo y el ADN de esta célula, tras la entrada, se transporta el genoma rcDNA del VHB en el núcleo y convertido en covalente cerrado ADN circular (ADNcc) utilizando la reparación del ADN de la célula huésped. Las moléculas de ADNcc de VHB se asocia con histonas H3 y H4 y proteínas no histónicas, formando un minicromosoma viral típico.

Referencias Bibliográficas:

1. Li G, Zhu Y, Shao D, Chang H, Zhang X, Zhou D, et al. Recombinant covalently closed circular DNA of hepatitis B virus induces long-term viral persistence with chronic hepatitis in a mouse model [Internet]. Vol. 67, Hepatology. John Wiley and Sons Inc.; 2018 [citado el 6 de diciembre de 2019]. p. 56–70. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28749559

Microarray de miRNAs

Se usó la técnica "Microarray" para determinar la presencia de ciertos microRNA (miRNA). Estos miRNA pueden servir como marcadores potenciales para predecir la lesión hepática resultante de la hepatitis B crónica (CHB). Se identificó 203 miRNA expresados en pacientes con hepatitis B crónica. Este resultado, en un futuro, puede servir para realizar un diagnóstico precoz de lesión hepática y prevenir su avance hacia otros estados más graves.

Referencias Bibliográficas:

1. Hou X, Liang Y, Chen J, Wei Y, Zeng P, Wang L et al. Expression Profiling of Cellular MicroRNA in Asymptomatic HBsAg Carriers and Chronic Hepatitis B Patients [Internet]. NCBI. 2017 [citado 28 Noviembre 2019]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5587942/

Southern Blot

La hepatitis B es causada por la infección por el virus hepatitis B (VHB). Como componente esencial del ciclo de vida viral, el ADN circular cerrado covalentemente del VHB (ADNcc) se sintetiza y se mantiene en un bajo número de copias en el núcleo de los hepatocitos infectados, y sirve como plantilla de transcripción para todos los ARN virales. El procedimiento incluye dos pasos principales: 1. Extracción de ADNccNa de VHB mediante el método de extracción de ADN sin proteína Hirt; 2. Detección de ADNcc de VHB mediante análisis de transferencai Southern.

El método es sencillo y confiable para el ensayo de ADNccNa con muestras de cultivos celulares, y el útil tanto para la biología molecular del VHB como para la investigación antiviral.

Referencias Bibliográficas:

1. Cai D, Nie H, Yan R, Guo JT, Block TM, Guo H. A southern blot assay for detection of hepatitis b virus covalently closed circular DNA from cell cultures [Internet]. Vol. 1030, Methods in Molecular Biology. 2013 [citado el 20 de noviembre de 2019]. p. 151–61. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5060941/

Prueba de PCR en Hepatitis B

Tema: PCR cuantitativa en tiempo real para el diagnóstico del virus de la hepatitis B y el virus de la hepatitis C.

Objetivo: Desarrollar un método sensible para cuantificar ADN de VHB y ARN de VHC en sueros de pacientes infectados mediante PCR cuantitativa en tiempo real para poder diagnosticar y dar un efectivo tratamiento para la Hepatitis viral.
Muestra biológica: Suero

Tipo de Ácido nucleico: ADN de VHB y ARN de VHC.

Gen a amplificar: Para el VHB se usó el gen S (116 bp) y para el VHC se se amplificó la región no codificante (238 bp)
Extracción del ADN: Se extrajo 200 μL de suero usando un kit QIAamp MinElute Virus Spin

Tipo de PCR: PCR en tiempo real (qPCR)
                         rt-PCR: 35 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 1minuto.
                                                       Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
                                                       Extención: 72 ºC por 2 minutos.
                         qPCR: 45 ciclos:   Desnaturalización: 95ºC por 15 segundos.
                                                       Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
                                                       Extención: 72 ºC por 2 minutos.
Visualización: Todos los productos de PCR se visualizaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida al 6% y tinción de geles con nitrato de plata.

Especificidad analítica: Los cálculos demostraron que el método es 100% efectivo en identificar el VHB en los individuos infectados. (No especifica información)
Sensibilidad analítica: La eficiencia del método para detectar VHB es del 38,72 %.  (No especifica información)

Referencias Bibliográficas:

1. Zauli DAG, Menezes CLP de, Oliveira CL de, Mateo ECC, Ferreira AC de S. In-house quantitative real-time PCR for the diagnosis of hepatitis B virus and hepatitis C virus infections [Internet]. Vol. 47, Brazilian Journal of Microbiology. Elsevier Editora Ltda; 2018 [citado el 13 de noviembre de 2019]. p. 987–92. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5052370/

Prueba de Tamizaje y Confirmatoria

Prueba de Tamizaje._ La prueba anti-core-total (Anti-HBcII) permite detectar la Hepatitis B, basado en un estudio de sangre donde tiene como objetivo la detección del antígeno de superficie de la Hepatitis B (HbsAg), donde para lograr esto se utiliza un anticuerpo (anti-HbsAg) en fase sólida, que se une al antígeno presente en el suero del paciente, el cual reacciona frente a un conjugado marcado con una coenzima, la que en contacto con un sustrato apropiado desarrolla una reacción colorimétrica la que puede ser leída visual o instrumentalmente.

Prueba Confirmatoria.- Las pruebas serológicas se realizan mediante pruebas de diagnóstico rápido (TDR) o inmunoensayos enzimáticos de laboratorio (EIA) para la detección del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg). La prueba de confirmación ELISA para muestras positivas de HBsAg sospechosas es un método de validación inicial simple, preciso y de bajo costo.

Referencias Bibliográficas:
1. Bottero J, Boyd A, Gozlan J, Carrat F, Lemoine M, Rougier H et al. Effectiveness of hepatitis B rapid tests toward linkage-to-care: results of a randomized, multicenter study. - PubMed - NCBI [Internet]. Ncbi.nlm.nih.gov. 2016 [cited 7 Noviembre 2019]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26954517
2. Parry J, Sands A, Easterbrook P. One or two serological assay testing strategy for diagnosis of HBV and HCV infection? The use of predictive modelling [Internet]. Ncbi.nlm.nih.gov. 2017 [cited 7 Noviembre 2019]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5688456/

Alteraciones en la Epigenómica

La metilación es un mecanismo de regulación de la expresión de genes, que consiste en la adición de grupos metilo a las citosinas de ciertas secuencias de ADN; esta modificación química puede producir el silenciamiento de un gen. Teniendo en cuenta que el genoma del VHB puede resistir en el núcleo de los hepatocitos en forma de minicrosoma, es posible que la metilación del ADN del VHB represente un mecanismo que puede modificar la replicación y la expresión de proteínas virales. Una evidencia de este mecanismo, es que la metilación de la secuencia que codifica para la proteína Core produce pérdida de expresión de la proteína; esto ha sido demostrado in vitro en una línea celular de hepatoma humano (PLC/PRF/5). Es importante mencionar que elementos reguladores del genoma del VHB se encuentran localizados en secuencias de ADN ricas en pares de citosinas y guanina.

Representación esquemática de los cambios de cromatina en el ADNcc en relación con la replicación viral.
Tomado de: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2015.01491/full

Referencias Bibliográficas:
1. Zeybel M, Vatansever S, Hardy T, et al. DNA methylation profiling identifies novel markers of progression in hepatitis B-related chronic liver disease. [internet] Clin Epigenetics. 2016; 8:48. [citado 30 Noviembre de 2019] Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4857425/

Alteración en la Traducción G1862T del HBV

Una sustitución de valina por fenialanina en la posición -3 de la escición del péptido da como resultado un cambio estructural del antígeno central de la hepatitis (HBcAg) y otros componentes del HBV como HBeAg, preC. Se ha demostrado que cuando existe una función normal de HBcAg se induce a activar vías que detonan en un posible hepatocarcinoma. Por lo tanto, pacientes que tienen el HBV con la mutación G1862T llevan una menor tendencia a la enfermedad hepática grave.

Referencias Bibliográficas:

1. Bhoola N, Kramvis A. Expression of wild-type or G1862T mutant HBe antigen of subgenotype A1 of hepatitis B virus and the unfolded protein response in Huh7 cells. Journal of General Virology [Internet]. 2017 [citado 24 octubre 2019]98(6):1422-1433. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28678685

Alteraciones en la Transcripción

La polimerasa del VHB presenta actividad de transcripción reversa, de ADN polimerasa y de ARNasa H; sin embargo, no posee actividad exonucleasa 3'-5' y por lo tanto no corrige los errores en la secuencia generados durante el proceso de retro-transcripción y de síntesis de la cadena positiva del genoma viral. La tasa de mutaciones del VHB es de 2,3 x 10^-5 sitios/año. Mutaciones en la secuencia que codifica el determinante "a" del HBsAg se denominan variantes de escape; estas mutaciones son importantes epidemiológicamente porque a pesar de que su prevalencia es baja, pueden ser seleccionadas y diseminarse causando así infección en individuos vacunados.

Mutaciones más frecuentes en la principal región hidrofílica del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B. En cuadro negro se muestran las variantes de escape en el determinante "a" asociadas a vacunación; en cuadro azul las variantes de escape fuera del determinante "a" y en cuadro naranja las mutaciones asociadas a resistencia antiviral en la región del ORF S que sobrelapa con el dominio catalítico de la polimerasa.

Referencias Bibliográficas:

1. Jaramillo C, Navas M. Variantes de escape del virus de la hepatitis B. Rev. chil. infectol.  [Internet]. 2015  Abr [citado  12 de octubre 2019] ;  32( 2 ): 190-197. Disponible en: https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-10182015000300008

2. Serra M. Virus de la Hepatitis B [Internet].2014 [citado 12 de Octubre 2019]. Disponible en: http://www.aefa.es/wp-content/uploads/2014/04/Virus-de-la-Hepatitis-B-.pdf
3.  Ryan K, Ray C. Sherris. Microbiología médica (6a. ed.). 6th ed. Distrito Federal: McGraw-Hill Interamericana; 2017.

Alteraciones en la Genómica

Es imprescindible la diferenciación de 4 genes: gen P (codifica ADN polimerasa viral), gen C (para HBcAg y HBeAg), gen S (para HBsAg) y gen X (para proteína no estructural: HBxAg). La región S es la región más conservada del ORF S del VHB; las mutaciones en esta tienen mucha relevancia en la antigenicidad de la proteína: una mutación se da en el nucléotido 587, donde la sustitución de adenosina por guanosina se traduce en cambios de los aminoácidos de la proteína de superficie (HBsAg), lo que origina una alteración en los epítopos inmunodominantes que impide su reconocimiento con anticuerpos monoclonales específicos.

Mutaciones más importantes reportadas en el ORF S (región S)del genoma del virus de hepatitis B

Referencias Bibliográficas:

1. Jaramillo C, Navas M. Variantes de escape del virus de la hepatitis B. Rev. chil. infectol.  [Internet]. 2015  Abr [citado  10 de octubre 2019] ;  32( 2 ): 190-197. Disponible en: https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-10182015000300008

2. Alonso R, Aguilera A, Córdoba J, Fuertes A. Diagnóstico microbiológico de las hepatitis virales. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 2015; 33(9): p. e53-e62. Disponible en: http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-cl inica-28-articulo-diagnosticomicrobiologico-las-hepatitis-virales-S0213005 X14003012
3. Macas Silva D. Diagnóstico serológico de la hepatitis b [Internet]. Repositorio Digital de la UTMACH. 2019 [citado 10 de octubre 2019]. Disponible en: http://186.3.32.121/handle/48000/13887

Hepatitis B

La Hepatitis es una enfermedad crónica necroinflamatoria del hígado causado por la infección del VHB (virus de la hepatitis B); pertenece a la familia Hepadnaviridae. Este sigue siendo un problema de salud pública mundial con cambios en la epidemiología debido a varios factores, incluidas las políticas de vacunación y la migración.

Es una de las principales causas de varias enfermedades hepáticas como hepatopatía crónica, cirrosis, y cáncer hepático.

Tomado de: https://medicinainternafase2ug.blogspot.com/2019/02/hepatitis-b.html

Referencias Bibliográficas:
1. Harrison, T., & Kasper, D. (2015). Harrison's Principles of Internal Medicine. New York: McGraw-Hill Medical Publ. Division
2. Hepatitis B [Internet]. Clínica Regional del Sud - Río Cuarto. 2019 [citado 3 Octubre 2019]. Disponible en: clinicaregionaldelsud.com/2017/07/hepatitis-b-2/
3. Asociación Europea para el Estudio del Hígado,  EASL 2017 Guías de práctica clínica sobre el tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis B, 2017 [internet] [citado el 03 de octubre de 2019] disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S016882781730185X
4. Guardiola A. Infección crónica por virus de la hepatitis B antígeno e negativo. Manejo en función de puntos de corte de glutámico-pirúvica transaminasa y ácido desoxirribonucleico del virus de la hepatitis B [Internet].2018 [citado 3 de octubre de 2019], 41(3); 153-152. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0210570517302431

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Bienvenidos a mi blog donde encontrarán noticias actualizadas en el campo de biología molecular, así como de otros campos competentes a la medicina.

Mi nombre es Lízbeth Rosero, estudiante de Medicina de tercer semestre (P3) de la Universidad Central del Ecuador, es un gusto para mí poder compartir información, espero esta sea de provecho.

Tomado de: https://retina.elpais.com/retina/2018/12/21/innovacion/1545388739_968425.html