Prueba de PCR en Hepatitis B

Tema: PCR cuantitativa en tiempo real para el diagnóstico del virus de la hepatitis B y el virus de la hepatitis C.

Objetivo: Desarrollar un método sensible para cuantificar ADN de VHB y ARN de VHC en sueros de pacientes infectados mediante PCR cuantitativa en tiempo real para poder diagnosticar y dar un efectivo tratamiento para la Hepatitis viral.
Muestra biológica: Suero

Tipo de Ácido nucleico: ADN de VHB y ARN de VHC.

Gen a amplificar: Para el VHB se usó el gen S (116 bp) y para el VHC se se amplificó la región no codificante (238 bp)
Extracción del ADN: Se extrajo 200 μL de suero usando un kit QIAamp MinElute Virus Spin

Tipo de PCR: PCR en tiempo real (qPCR)
                         rt-PCR: 35 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 1minuto.
                                                       Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
                                                       Extención: 72 ºC por 2 minutos.
                         qPCR: 45 ciclos:   Desnaturalización: 95ºC por 15 segundos.
                                                       Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
                                                       Extención: 72 ºC por 2 minutos.
Visualización: Todos los productos de PCR se visualizaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida al 6% y tinción de geles con nitrato de plata.

Especificidad analítica: Los cálculos demostraron que el método es 100% efectivo en identificar el VHB en los individuos infectados. (No especifica información)
Sensibilidad analítica: La eficiencia del método para detectar VHB es del 38,72 %.  (No especifica información)

Referencias Bibliográficas:

1. Zauli DAG, Menezes CLP de, Oliveira CL de, Mateo ECC, Ferreira AC de S. In-house quantitative real-time PCR for the diagnosis of hepatitis B virus and hepatitis C virus infections [Internet]. Vol. 47, Brazilian Journal of Microbiology. Elsevier Editora Ltda; 2018 [citado el 13 de noviembre de 2019]. p. 987–92. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5052370/