Microarray de miRNAs

Se usó la técnica "Microarray" para determinar la presencia de ciertos microRNA (miRNA). Estos miRNA pueden servir como marcadores potenciales para predecir la lesión hepática resultante de la hepatitis B crónica (CHB). Se identificó 203 miRNA expresados en pacientes con hepatitis B crónica. Este resultado, en un futuro, puede servir para realizar un diagnóstico precoz de lesión hepática y prevenir su avance hacia otros estados más graves.

Referencias Bibliográficas:

1. Hou X, Liang Y, Chen J, Wei Y, Zeng P, Wang L et al. Expression Profiling of Cellular MicroRNA in Asymptomatic HBsAg Carriers and Chronic Hepatitis B Patients [Internet]. NCBI. 2017 [citado 28 Noviembre 2019]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5587942/

Southern Blot

La hepatitis B es causada por la infección por el virus hepatitis B (VHB). Como componente esencial del ciclo de vida viral, el ADN circular cerrado covalentemente del VHB (ADNcc) se sintetiza y se mantiene en un bajo número de copias en el núcleo de los hepatocitos infectados, y sirve como plantilla de transcripción para todos los ARN virales. El procedimiento incluye dos pasos principales: 1. Extracción de ADNccNa de VHB mediante el método de extracción de ADN sin proteína Hirt; 2. Detección de ADNcc de VHB mediante análisis de transferencai Southern.

El método es sencillo y confiable para el ensayo de ADNccNa con muestras de cultivos celulares, y el útil tanto para la biología molecular del VHB como para la investigación antiviral.

Referencias Bibliográficas:

1. Cai D, Nie H, Yan R, Guo JT, Block TM, Guo H. A southern blot assay for detection of hepatitis b virus covalently closed circular DNA from cell cultures [Internet]. Vol. 1030, Methods in Molecular Biology. 2013 [citado el 20 de noviembre de 2019]. p. 151–61. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5060941/

Prueba de PCR en Hepatitis B

Tema: PCR cuantitativa en tiempo real para el diagnóstico del virus de la hepatitis B y el virus de la hepatitis C.

Objetivo: Desarrollar un método sensible para cuantificar ADN de VHB y ARN de VHC en sueros de pacientes infectados mediante PCR cuantitativa en tiempo real para poder diagnosticar y dar un efectivo tratamiento para la Hepatitis viral.
Muestra biológica: Suero

Tipo de Ácido nucleico: ADN de VHB y ARN de VHC.

Gen a amplificar: Para el VHB se usó el gen S (116 bp) y para el VHC se se amplificó la región no codificante (238 bp)
Extracción del ADN: Se extrajo 200 μL de suero usando un kit QIAamp MinElute Virus Spin

Tipo de PCR: PCR en tiempo real (qPCR)
                         rt-PCR: 35 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 1minuto.
                                                       Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
                                                       Extención: 72 ºC por 2 minutos.
                         qPCR: 45 ciclos:   Desnaturalización: 95ºC por 15 segundos.
                                                       Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
                                                       Extención: 72 ºC por 2 minutos.
Visualización: Todos los productos de PCR se visualizaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida al 6% y tinción de geles con nitrato de plata.

Especificidad analítica: Los cálculos demostraron que el método es 100% efectivo en identificar el VHB en los individuos infectados. (No especifica información)
Sensibilidad analítica: La eficiencia del método para detectar VHB es del 38,72 %.  (No especifica información)

Referencias Bibliográficas:

1. Zauli DAG, Menezes CLP de, Oliveira CL de, Mateo ECC, Ferreira AC de S. In-house quantitative real-time PCR for the diagnosis of hepatitis B virus and hepatitis C virus infections [Internet]. Vol. 47, Brazilian Journal of Microbiology. Elsevier Editora Ltda; 2018 [citado el 13 de noviembre de 2019]. p. 987–92. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5052370/

Prueba de Tamizaje y Confirmatoria

Prueba de Tamizaje._ La prueba anti-core-total (Anti-HBcII) permite detectar la Hepatitis B, basado en un estudio de sangre donde tiene como objetivo la detección del antígeno de superficie de la Hepatitis B (HbsAg), donde para lograr esto se utiliza un anticuerpo (anti-HbsAg) en fase sólida, que se une al antígeno presente en el suero del paciente, el cual reacciona frente a un conjugado marcado con una coenzima, la que en contacto con un sustrato apropiado desarrolla una reacción colorimétrica la que puede ser leída visual o instrumentalmente.

Prueba Confirmatoria.- Las pruebas serológicas se realizan mediante pruebas de diagnóstico rápido (TDR) o inmunoensayos enzimáticos de laboratorio (EIA) para la detección del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg). La prueba de confirmación ELISA para muestras positivas de HBsAg sospechosas es un método de validación inicial simple, preciso y de bajo costo.

Referencias Bibliográficas:
1. Bottero J, Boyd A, Gozlan J, Carrat F, Lemoine M, Rougier H et al. Effectiveness of hepatitis B rapid tests toward linkage-to-care: results of a randomized, multicenter study. - PubMed - NCBI [Internet]. Ncbi.nlm.nih.gov. 2016 [cited 7 Noviembre 2019]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26954517
2. Parry J, Sands A, Easterbrook P. One or two serological assay testing strategy for diagnosis of HBV and HCV infection? The use of predictive modelling [Internet]. Ncbi.nlm.nih.gov. 2017 [cited 7 Noviembre 2019]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5688456/